(2)質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoR Ⅰ切割后產(chǎn)生的片段如下：

　　AATTC……G

　　G……CTTAA

　　為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoR Ⅰ切割外，還可用另一種限制性?xún)?nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是________________________________________________________________________。

　　(3)按其來(lái)源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類(lèi)，即________DNA連接酶和________DNA連接酶。

　　(4)反轉(zhuǎn)錄作用的模板是________，產(chǎn)物是________。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用________技術(shù)。

　　(5)基因工程中除質(zhì)粒外，________和________也可作為運(yùn)載體。

　　(6)若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是______________________________________________。

　　40.(1)黏性末端　平末端

　　(2)切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoR Ⅰ切割產(chǎn)生的相同

　　(3)大腸桿菌　 T4

　　(4)mRNA(或RNA)　cDNA(或DNA)　 PCR

　　(5)噬菌體　動(dòng)植物病毒

　　(6)未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱

　　[解析] 本題考查基因工程技術(shù)，考查學(xué)生的理解能力。(1)當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA的兩條鏈分別切開(kāi)時(shí)，產(chǎn)生的是黏性末端，而當(dāng)限制酶在它識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)，產(chǎn)生的則是平末端。(2)為使運(yùn)載體與目的基因相連，不同的限制酶應(yīng)切割出相同的黏性末端，它們必須要能識(shí)別相同的核苷酸序列。(3)根據(jù)酶的來(lái)源不同，DNA連接酶可以分為兩類(lèi)：一類(lèi)是從大腸桿菌中分離得到的，稱(chēng)為大腸桿菌E•coli DNA連接酶;另一類(lèi)是從T4噬菌體中分離出來(lái)的，稱(chēng)為T(mén)4 DNA連接酶。(4)反轉(zhuǎn)錄是以mRNA(或RNA)為模板合成cDNA(或DNA)的過(guò)程。可以在體外短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增DNA的技術(shù)叫PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)。(5)基因工程中除質(zhì)粒外，還有λ噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒等可作為運(yùn)載體。(6)大腸桿菌細(xì)胞外有細(xì)胞壁，能阻止其他物質(zhì)的進(jìn)入，只能通過(guò)Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的感受態(tài)才能使重組質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞，未處理的大腸桿菌吸收重組質(zhì)粒的能力極弱。

　　32.L6[2012•江蘇卷] 圖11表示含有目的基因D 的DNA 片段長(zhǎng)度(bp 即堿基對(duì))和部分堿基序列，圖12表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列。現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4 種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

　　圖11　　　　　　　　　　　圖12

　　(1)圖11的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由__________________連接。

　　(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖11中DNA片段，產(chǎn)生的末端是________末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為_(kāi)_______。

　　(3)若圖11中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A 堿基對(duì)替換，那么基因D 就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖11及其對(duì)應(yīng)的DNA 片段，用限制酶Sma Ⅰ完全切割，產(chǎn)物中共有________種不同長(zhǎng)度的DNA 片段。

　　(4)若將圖12中質(zhì)粒和目的基因D 通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是________。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌， 一般需要用添加________的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè)，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是________________________________________________________________________

　　________________________________________________________________________。

　　32.(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖

　　(2)平　537 bp、790 bp、661 bp

　　(3)4

　　(4)BamHⅠ　抗生素B　同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接

　　[解析] 本題考查基因工程，考查學(xué)生分析及理解能力。(1)據(jù)DNA分子的結(jié)構(gòu)可知，在一條鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間的連接為：堿基-脫氧核糖-磷酸-脫氧核糖-堿基。(2)圖11 DNA分子中，限制酶SmaⅠ的切割位點(diǎn)有2個(gè)，可將該DNA切割為3個(gè)片段，據(jù)圖中切割位置可數(shù)出，3個(gè)片段的長(zhǎng)度依次為537 bp、790 bp、661 bp。(3)基因D突變?yōu)榛騞后，只有1個(gè)限制酶SmaⅠ的切割位點(diǎn)，基因d被切割為1 327 bp和661 bp 2種片段;雜合子中還有基因D，可被切割為3種片段，因此產(chǎn)物中共4種片段。(4)目的基因的插入位點(diǎn)應(yīng)在一個(gè)標(biāo)記基因內(nèi)，若選用限制酶MboⅠ，則兩個(gè)標(biāo)記基因都會(huì)被切開(kāi)，因此只能選擇限制酶BamHⅠ，因此應(yīng)加入抗生素B進(jìn)行篩選。含目的基因的DNA片段和運(yùn)載體用同種限制酶切割，可能會(huì)發(fā)生反向連接，使部分菌株中基因D不能表達(dá)。

　　32.L6、L8[2012•福建卷] [生物—現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題]

　　肺細(xì)胞中的let­7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let­7基因?qū)敕伟┘?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。

　　圖1

　　圖2

　　請(qǐng)回答：

　　(1)進(jìn)行過(guò)程①時(shí)，需用____________酶切開(kāi)載體以插入let­7基因。載體應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動(dòng)let­7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱(chēng)為_(kāi)_______。

　　(2)進(jìn)行過(guò)程②時(shí)，需用______酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。

　　(3)研究發(fā)現(xiàn)，let­7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖2。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞中提取______進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let­7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中______(RAS mRNA/RAS蛋白)含量減少引起的。

　　32.(1)限制性核酸內(nèi)切(或限制)　啟動(dòng)子

　　(2)胰蛋白　(3)RNA　RAS蛋白

　　[解析] 本題主要考查有關(guān)基因工程和細(xì)胞工程中的知識(shí)。(1)過(guò)程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在該過(guò)程中需要用限制酶對(duì)載體進(jìn)行切割以便于目的基因的插入;啟動(dòng)子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶結(jié)合和識(shí)別的位點(diǎn)，RNA聚合酶結(jié)合到該位點(diǎn)，可驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。(2)過(guò)程②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)接觸性抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個(gè)的細(xì)胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進(jìn)行傳代培養(yǎng)。(3)判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進(jìn)行雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細(xì)胞中的let­7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)就增強(qiáng)，引發(fā)肺癌”，導(dǎo)入let­7基因后，肺癌細(xì)胞受到抑制，說(shuō)明RAS基因表達(dá)減弱，導(dǎo)致細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞受抑制。

　　31.G3、L6 [2012•安徽卷] 甲型血友病是由X染色體上的隱性基因?qū)е碌倪z傳病(H對(duì)h為顯性)。圖4中兩個(gè)家系都有血友病發(fā)病史，Ⅲ2和Ⅲ3婚后生下一個(gè)性染色體組成是XXY的非血友病兒子(Ⅳ2)，家系中的其他成員性染色體組成均正常。

　　圖4

　　(1)根據(jù)圖4，________(填“能”或“不能”)確定Ⅳ2兩條X染色體的來(lái)源;Ⅲ4與正常女子結(jié)婚，推斷其女兒患血友病的概率是________。

　　(2)兩個(gè)家系的甲型血友病均由凝血因子Ⅷ(簡(jiǎn)稱(chēng)F8，即抗血友病球蛋白)基因堿基對(duì)缺失所致。為探明Ⅳ2的病因，對(duì)家系的第Ⅲ、Ⅳ代成員F8基因的特異片段進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖5所示，結(jié)合圖4，推斷Ⅲ3的基因型是________。請(qǐng)用圖解和必要的文字說(shuō)明Ⅳ2非血友病XXY的形成原因。

　　圖5

　　(3)現(xiàn)Ⅲ3再次懷孕，產(chǎn)前診斷顯示胎兒(Ⅳ3)細(xì)胞的染色體為46，XY;F8基因的PCR檢測(cè)結(jié)果如圖5所示。由此建議Ⅲ3________。

　　(4)補(bǔ)給F8可治療甲型血友病。采用凝膠色譜法從血液中分離純化F8時(shí)，在凝膠裝填色譜柱后，需要用緩沖液處理較長(zhǎng)時(shí)間，其目的是________;若F8比某些雜蛋白先收集到，說(shuō)明F8的相對(duì)分子質(zhì)量較這些雜蛋白________。

　　(5)利用轉(zhuǎn)基因豬乳腺生物反應(yīng)器可生產(chǎn)F8。要使乳腺細(xì)胞合成F8，構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，必須將F8基因cDNA與豬乳腺蛋白基因的________等調(diào)控組件重組在一起。F8基因cDNA可通過(guò)克隆篩選獲得，該cDNA比染色體上的F8基因短，原因是該cDNA沒(méi)有________。

　　(6)為獲得更多的轉(zhuǎn)基因母豬，可以采用體細(xì)胞克隆技術(shù)，將純合轉(zhuǎn)基因母豬的體細(xì)胞核注入____________，構(gòu)建重組胚胎進(jìn)行繁殖。

　　31.(1)不能　0

　　(2)XHXh　圖解如下

　　在Ⅲ3形成卵細(xì)胞過(guò)程中的減數(shù)第二次分裂后期，帶有基因H的姐妹染色單體移向細(xì)胞同一極，形成XHXH卵細(xì)胞。XHXH卵細(xì)胞與正常精子結(jié)合形成XHXHY受精卵。

　　(3)終止妊娠

　　(4)洗滌平衡凝膠，并使凝膠裝填緊密　大

　　(5)啟動(dòng)子　內(nèi)含子

　　(6)去核的卵母細(xì)胞

　　[解析] 本題考查人類(lèi)遺傳病、減數(shù)分裂、蛋白質(zhì)的提取等相關(guān)知識(shí)，考查學(xué)生的分析與綜合能力。(1)Ⅳ2的性染色體組成是XXY，這兩條X染色體，有可能是精子形成過(guò)程中同源染色體沒(méi)有分開(kāi)，形成了一個(gè)含有

　　XY染色體的配子，也可能是減數(shù)第一次分裂后期同源染色體未分離，也可能是減數(shù)第二次分裂后期染色單體分開(kāi)后未移向兩極，形成了含有兩條X染色體的配子，故無(wú)法判斷兩條X染色體的來(lái)源。Ⅲ4的基因型是XHY，肯定將XH傳給女兒，女兒不可能患血友病。(2)Ⅲ2是血友病患者，含有Xh，圖中位于下部的條帶均應(yīng)含有Xh基因，上面的條帶應(yīng)含XH基因，則Ⅲ3的基因型是XHXh，Ⅳ2是非血友病患者，且從條帶的位置可以看出其基因型是XHXHY，故不可能在減數(shù)第一次分裂時(shí)出現(xiàn)異常產(chǎn)生含有XHXh的配子，精子的形成過(guò)程正常，圖解如答案所示。(3)Ⅲ3再次懷孕的孩子是男孩，從條帶結(jié)果看含有基因Xh，為血友病患者，應(yīng)當(dāng)終止妊娠。(4)凝膠裝填色譜柱后用緩沖液處理較長(zhǎng)時(shí)間，目的是洗滌平衡凝膠，并使凝膠裝填緊密。(5)表達(dá)載體上的調(diào)控組件包括啟動(dòng)子和終止子，基因必須含有啟動(dòng)子才能開(kāi)始復(fù)制。真核細(xì)胞基因的編碼區(qū)含有外顯子和內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄出成熟的mRNA時(shí)經(jīng)過(guò)了剪切，mRNA上不含有內(nèi)含子，cDNA是mRNA通過(guò)反轉(zhuǎn)錄得到的，也就不含內(nèi)含子。(6)動(dòng)物細(xì)胞核移植的受體細(xì)胞是去核的卵母細(xì)胞。

　　L7 植物細(xì)胞工程與植物的組織培養(yǎng)技術(shù)

　　34.L5L7[2012•山東卷] [生物—生物技術(shù)實(shí)踐]

　　辣椒素作為一種生物堿廣泛用于食品保健、醫(yī)藥工業(yè)等領(lǐng)域。辣椒素的獲得途徑如圖所示。

　　(1)圖中①和②分別表示辣椒組織培養(yǎng)中細(xì)胞的________和________過(guò)程。

　　(2)圖中培養(yǎng)外植體的培養(yǎng)基中常用的凝固劑是__________。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素用量的比值________(填“高”或“低”)時(shí)，有利于芽的分化。對(duì)培養(yǎng)基徹底滅菌時(shí)，應(yīng)采取的滅菌方法是________________________________________________________________________。

　　(3)圖中外植體的消毒所需酒精的體積分?jǐn)?shù)是__________。用酶解法將愈傷組織分離成單細(xì)胞時(shí)，常用的酶是________和纖維素酶。

　　(4)提取辣椒素過(guò)程中，萃取加熱時(shí)需安裝冷凝回流裝置，其目的是______________。

　　34.(1)脫分化(或去分化)　再分化

　　(2)瓊脂　低　高壓蒸汽滅菌法

　　(3)70%　果膠酶　防止有機(jī)溶劑揮發(fā)

　　[解析] 本題主要考查植物組織培養(yǎng)的過(guò)程和植物成分的提取中的注意事項(xiàng)。由外植體得到愈傷組織的過(guò)程是脫分化過(guò)程，由愈傷組織得到根、芽的過(guò)程是再分化過(guò)程;培養(yǎng)基中的植物激素能夠促進(jìn)植物的生長(zhǎng)和發(fā)育，當(dāng)生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素的比值低時(shí)有利于芽的分化，當(dāng)比值高時(shí)有利于根的分化;對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行徹底滅菌常用高壓蒸汽滅菌法;外植體的消毒所需酒精的體積分?jǐn)?shù)是70%; 細(xì)胞間的主要成分纖維素和果膠，分離細(xì)胞要用到纖維素酶和果膠酶;用冷凝回流裝置可以防止有機(jī)溶劑隨蒸汽揮發(fā)。

　　39.L7[2012•課標(biāo)全國(guó)卷] [生物—選修1生物技術(shù)實(shí)踐]

　　為了探究6—BA和IAA對(duì)某菊花品種莖尖外植體再生叢芽的影響，某研究小組在MS培養(yǎng)基中加入6—BA和IAA，配制成四種培養(yǎng)基(見(jiàn)下表)，滅菌后分別接種數(shù)量相同、生長(zhǎng)狀態(tài)一致、消毒后的莖尖外植體，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)再生叢芽外植體的比率(m)，以及再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)，結(jié)果如下表。

　　培養(yǎng)基編號(hào)

　　1

　　2

　　3

　　4

　　濃度/mg•L-1

　　6—BA IAA

　　0.5

　　0

　　0.1

　　0.2

　　0.5

　　m/% n/個(gè)

　　76.7 3.1

　　77.4 6.1

　　66.7 5.3

　　60.0 5.0

　　回答下列問(wèn)題：

　　(1)按照植物的需求量，培養(yǎng)基中無(wú)機(jī)鹽的元素可分為_(kāi)_______和________兩類(lèi)。上述培養(yǎng)基中，6—BA屬于________類(lèi)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。

　　(2)在該實(shí)驗(yàn)中，自變量是________，因變量是______________________________________，自變量的取值范圍是________。

　　(3)從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，誘導(dǎo)叢芽總數(shù)最少的培養(yǎng)基是________號(hào)培養(yǎng)基。

　　(4)為了誘導(dǎo)該菊花試管苗生根，培養(yǎng)基中一般不加入________(填“6—BA”或“IAA”)。

　　39.(1)大量元素　微量元素　細(xì)胞分裂素

　　(2) IAA的濃度　再生叢芽外植體的比率(m)和再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)　0～0.5 mg•L-1　(3)1　(4)6-BA

　　[解析] 本題考查IAA和 6-BA對(duì)植物組織培養(yǎng)的影響，考查學(xué)生的理解能力。(1)根據(jù)植物的需求量，元素可以分為大量元素和微量元素，6-BA屬于細(xì)胞分裂素類(lèi)的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。(2)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)中的步驟中的數(shù)據(jù)可知，6-BA濃度不變，IAA濃度范圍是0～0.5 mg•L-1，由小到大變化是自變量。根據(jù)題干信息可知再生叢芽外植體的比率(m)和再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)是因變量。(3)再生叢芽外植體的比率(m)乘以再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)即為叢芽總數(shù)，所以最少的是1號(hào)培養(yǎng)基。(4)誘導(dǎo)試管苗生根需要生長(zhǎng)素用量和細(xì)胞分裂素用量的比值比較高，所以培養(yǎng)基中不需要加6-BA。

　　2.L7 [2012•廣東卷] 培育草莓脫毒苗所采用的主要技術(shù)是(　　)

　　A.組織培養(yǎng)　　　　　　　B.細(xì)胞雜交

　　C.顯微注射 D.核移植

　　2.A　[解析] 草莓是無(wú)性繁殖的作物，它感染的病毒很容易傳播給后代，病毒在作物體內(nèi)逐年積累，就會(huì)導(dǎo)致作物產(chǎn)量降低，品質(zhì)變差。而植株分生區(qū)附近(如莖尖)的細(xì)胞含病毒極少，甚至無(wú)病毒，因此可以利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)出脫毒幼苗。植物體細(xì)胞雜交就是將不同的植物體細(xì)胞在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新植物體的技術(shù)。動(dòng)物細(xì)胞融合也稱(chēng)細(xì)胞雜交。顯微注射是將含有目的基因的表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的方法。核移植是培養(yǎng)克隆動(dòng)物的方法。故選A。